• 研究应用： TWEAK/cIAP1/NF-κB信号轴调控研究；细胞增殖、迁移与凋亡表型分析；LPS诱导信号通路激活模型；微环境因子分泌检测
• 引用产品： Acteoside (英文全称: Acteoside, 品牌: AbMole, 规格: HPLC 98%)
• 文献标题： Acteoside inhibits the progression of squamous cell carcinoma by regulating the TWEAK/cIAP1/NF-κB signaling axis and secretion of IL-6, IL-8 and VEGF
• 期刊名称： Phytomedicine
• DOI： 10.1016/j.phymed.2026.155737

研究背景与核心问题

TWEAK/cIAP1/NF-κB信号轴是调控细胞增殖、迁移与凋亡的核心通路之一。该轴上游由TWEAK与FN14结合启动，招募cIAP1并促进RIP1泛素化，进而激活IKK复合物与NF-κB下游级联。天然苯乙醇苷类化合物Acteoside（分子量624.59）广泛存在于Verbena、Cistanche等植物中，既往研究提示其具备调控PKC、PI3K等多条信号通路的潜力。然而，Acteoside对TWEAK/cIAP1/NF-κB轴的具体作用位点与分子动力学特征尚未明确。

关键试剂与实验设计

本研究采用的Acteoside由AbMole 提供，HPLC纯度达98%。体内实验部分，该化合物以生理盐水混悬后经腹腔注射，剂量梯度设为30、60、120 mg/kg，连续干预10天。体外细胞实验选用A431与SCC9细胞系，Acteoside处理浓度分别为25、50、100 μmol/mL，干预时间24 h。细胞活力通过CCK-8检测，迁移能力采用划痕实验评估，凋亡率由Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量。为验证Acteoside对激活态信号轴的干预效果，另设LPS预激活2 h后再联合Acteoside处理24 h的实验组。

分子对接与动力学模拟

在靶点预测与计算机模拟层面，研究团队通过SwissTargetPrediction和HERB数据库筛选Acteoside潜在靶点，并与TWEAK、FN14、cIAP1、RIP1及NF-κB进行分子对接。AutoDockTools 1.5.6计算结果显示，Acteoside与上述五蛋白的结合能依次为-8.8、-6.9、-8.0、-8.6、-8.9 kcal/mol。GROMACS 2025.3 package执行的100 ns分子动力学模拟显示，ACT-TWEAK与ACT-cIAP1复合物分别在30 ns与50 ns后达到构象稳定，ACT-NF-κB复合物在0-100 ns全程维持低RMSD波动。Rg、RMSF、SASA及氢键计数均支持Acteoside与靶蛋白形成稳定的受体-配体复合物。

体外细胞表型与通路蛋白验证

细胞表型实验表明，AbMole Acteoside以浓度依赖性方式抑制A431与SCC9细胞的增殖活性，24 h IC₅₀分别为48.97 μmol/mL与53.15 μmol/mL。划痕实验显示，100 μmol/mL Acteoside在48 h内几乎完全阻断细胞迁移。Annexin V-FITC/PI流式检测证实，Acteoside显著升高早期与晚期凋亡细胞比例。Western blot结果进一步显示，Acteoside下调TWEAK、cIAP1、NF-κB总蛋白表达，并呈浓度依赖性降低p-NF-κB磷酸化水平。在LPS预激活模型中，25与50 μmol/mL Acteoside显著逆转LPS诱导的TWEAK、FN14、cIAP1、NF-κB及p-NF-κB上调，提示该化合物对激活态TWEAK/cIAP1/NF-κB轴具有功能性拮抗作用。

NF-κB核转位阻断

免疫荧光亚细胞定位实验显示，静息状态下NF-κB主要分布于胞质，核内荧光信号微弱；LPS刺激后核内荧光强度显著增强，提示核转位激活。单独Acteoside处理对NF-κB亚细胞分布无显著干扰，但LPS+Acteoside共处理组核内荧光强度明显回落。该结果证实Acteoside通过阻断NF-κB核转位，抑制LPS驱动的NF-κB通路激活。

体内机制验证与微环境因子检测

在Balb/c裸鼠细胞移植模型中，AbMole Acteoside 30、60、120 mg/kg剂量组的组织块体积抑制率分别为38.61%、54.46%与77.89%。IHC与IF显示Ki67阳性率随剂量增加而递减。WB与qPCR结果一致表明，Acteoside下调移植组织中TWEAK、FN14、TRAIL-R3、cIAP1、RIP1、NF-κB的蛋白与mRNA表达，并呈剂量依赖性抑制p-NF-κB磷酸化。ELISA检测显示，IL-6、IL-8、VEGF水平在Acteoside干预后显著下降。

结论与机制总结

分子对接、细胞表型与动物模型的三层数据交叉验证了AbMole高纯度Acteoside对TWEAK/cIAP1/NF-κB信号轴的多靶点调控能力。体外实验中，该化合物抑制细胞增殖与迁移、促进凋亡并阻断NF-κB核转位；体内实验则证实其下调通路关键分子表达并减少微环境因子分泌。这些发现为Acteoside作为TWEAK/cIAP1/NF-κB轴调控工具化合物提供了实验依据，也为天然产物在信号通路机制研究中的多靶点干预策略提供了参考。

文献引用信息

• 研究应用： TWEAK/cIAP1/NF-κB信号轴调控研究；细胞增殖、迁移与凋亡表型分析；LPS诱导信号通路激活模型；微环境因子分泌检测
• 引用产品： Acteoside (英文全称: Acteoside, 品牌: AbMole, 规格: HPLC 98%)
• 文献标题： Acteoside inhibits the progression of squamous cell carcinoma by regulating the TWEAK/cIAP1/NF-κB signaling axis and secretion of IL-6, IL-8 and VEGF
• 期刊名称： Phytomedicine
• DOI： 10.1016/j.phymed.2026.155737