化学性质:
溶解性:可溶于DMSO(20 mg/mL)、DMF。
密度:1.303。
沸点:664.2±55.0 °C(预测值)。
酸度系数(pKa):3.35±0.50(预测值)。
外观:无色至浅黄色粘稠液体。
基本参数:
CAS:99590-86-0
英文名:EGTA AM,EGTA Acetoxymethyl ester
分子式:C26H40N2O18
分子量:668.60
规格标准:1g、5g、10g
试剂厂家:陕西新研博美生物科技有限公司
结构式:

相关应用:
细胞内钙信号研究:
抑制钙振荡:50 μM EGTA AM可降低异步兴奋性突触后电流(aEPSC)至对照的58.9%。
缓冲胞质钙浓度:用于研究钙依赖性酶、通道蛋白等。
与其他技术的联用:
荧光探针校准:与MOPS-EGTA缓冲液配合,建立标准钙浓度曲线。
神经元研究:调节突触传递精度,降低动作电位抖动(如从±1.51 ms降至±1.08 ms)。
使用方法:
溶液配制:
储备液制备:EGTA AM需溶于无水DMSO或DMF,避免水解。建议浓度为2-5 mM。避光、密封分装,-20℃保存,有效期6-12个月。
工作液稀释:取2X工作液,与等体积细胞培养基混合,终浓度为2.5 μM EGTA AM、0.04% Pluronic F-127、1 mM丙磺舒。
细胞加载步骤:
细胞准备:将细胞接种于培养板,确保生长至70%-80%密度,弃去旧培养基。
染料加载:将EGTA AM工作液加入细胞中,37℃、5% CO?孵育20-120分钟。全程避光,避免DMSO或EGTA AM光降解。
去除未结合探针:孵育结束后,用含1 mM丙磺舒的缓冲液替换染料溶液,洗涤2-3次,去除表面残留探针。
作用机制:
EGTA AM是钙螯合剂EGTA的细胞膜渗透性衍生物。其结构核心是EGTA分子上的四个羧酸基团被乙酰氧基甲酯(AM)修饰,赋予其脂溶性,使其能够被动扩散穿过细胞膜。进入细胞后,AM基团被胞内酯酶水解,释放活性形式的EGTA,特异性螯合胞内钙离子。
膜渗透与水解:
被动扩散:EGTA AM的AM酯基团使其脂溶性增强,可自由穿过细胞膜进入胞质。
酯酶水解:胞内酯酶将AM基团水解,生成非脂溶性EGTA,滞留于细胞内,避免被排出。
钙离子螯合:
高选择性结合:EGTA对Ca2+的亲和力高于Mg2+,解离常数(Kd)分别为60.5 nM和1-10 mM,选择性达10?倍。
生理pH适应性:在生理pH(7.4)下,EGTA的表观pKa为6.91,确保其在细胞内稳定螯合Ca2?。
注意事项:
纯度标准95%+
保存建议:避免反复冻融,避光保存,储液应该立即使用,任何未用的溶液分装小份冷冻于 < -20
注意事项:仅用于科学研究
相关试剂(部分):
Carboxyl diazirine alkyne
L-Azidonorleucine hydrochloride
Cyclic AMP sodium
EGTA-AM
Fluorescein Diacetate
Fmoc-Arg(Pbf)-OH
Tri-GalNAc-DBCO
DBCO-PEG4-Biotin
N-Hydroxysuccinimide
4-Aminobenzaldehyde
UDP-GalNAz disodium
Rhodamine B isothiocyanate
4-Azido-L-phenylalanine
Palmitic acid sodium
5-Ethynyluridine
Tris(benzyltriazolylmethyl)amine
Ethylenediaminetetraacetic acid
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