一、物化性质

保存条件：避光、-20°C储存，避免反复冻融

溶解性：溶于DMSO、DMF等有机溶剂

英文名称：AF594 Ethyl NHS Ester ，Alexa Fluor594 Ethyl NHS Ester

中文名称：AF594叠氮

分子式：C51H67N5O13S2

分子量：1022.23

规格：5mg，10mg，25mg

纯度：95%+

二、在荧光标记中的作用过程

（一）标记目标分子

AF594 Ethyl NHS Ester可标记含伯胺的生物分子：

蛋白质/抗体：标记赖氨酸残基。

多肽/氨基修饰寡核苷酸。

凝集素/鬼笔环肽：如Annexin V、WGA、Phalloidin。

（二）标记流程：

制备储备液：将AF594 Ethyl NHS Ester溶于无水DMSO/DMF。

偶联反应：

目标分子溶于pH 8.3的0.1–0.2 M碳酸氢钠缓冲液。

按摩尔比（染料:蛋白 = 5–20:1）加入染料储备液，避光室温反应1–2小时。

纯化：

通过凝胶过滤层析或超滤法去除游离染料。

产物验证：

紫外光谱检测标记率（DOL），荧光强度与标记度正相关。

（三）荧光检测优势

高灵敏度：摩尔吸光系数达105,000 cm⁻¹M⁻¹，标记后信号显著增强。

多色兼容性：与AF488（绿）、AF647（远红）等组合，实现多通道成像。

低背景干扰：橙红色荧光穿透力强，适用于厚组织切片。

三、应用场景

（一）细胞生物学研究

凋亡检测：AF594-Annexin V标记磷脂酰丝氨酸（PS），流式细胞术定量凋亡细胞。

细胞骨架成像：Phalloidin-AF594特异性结合微丝，共聚焦显微镜观察细胞形态。

细胞膜标记：AF594-WGA结合糖蛋白，示踪细胞膜动态。

（二）分子互作与药物递送

抗体-药物偶联物（ADC） ：通过NHS酯连接抗体与药物，增强靶向性。

生物正交化学：AF594-炔烃/叠氮用于点击化学标记。

（三）材料科学

生物材料修饰：AF594标记胶原蛋白（如BSC胶原），研究细胞-ECM相互作用

四、关联试剂

Cy7.5-COOH

SiR-PEG4-BCN

Pyrromethene 556

ATTO 488 NHS ester

TAMRA-PEG8-Alkyne

ATTO 680 NHS Ester

Fast Red TR napadisylate

Alexa Fluor 555 maleimide

NOTA-(COOt-Bu)3-Bn-NCS

Maleimide-PEG2-NHS Ester

N-(2-Aminoethyl)Maleimide TFA salt

AF514 carboxylic acid，AF514 COOH

AF 532 LEL；AF 532标记的番茄凝集素

AF 488 TFP ester，Alexa Fluor488 TFP ester

（本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理）